牛结节性皮肤病病毒ORF002蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

来源：畜牧兽医学报杂志2025年第11期北京时间：

作者：张亚岭, 景伟, 赵妍, 何小兵, 房永祥, 苏洋, 李小明, 张慧, 景志忠, 陈国华

单位：中国农业科学院兰州兽医研究所 动物疫病防控全国重点实验室, 兰州 730046

摘要：本研究旨在建立一种基于牛结节性皮肤病病毒(LSDV)ORF002蛋白的间接ELISA抗体检测方法。通过构建重组质粒pET-30a(+)-ORF002并诱导表达，获得相对分子质量约为13 ku的蛋白，以SDS-PAGE和Western blot验证后的ORF002蛋白为包被抗原，建立LSDV间接ELISA抗体检测方法并进行条件优化。优化后的间接ELISA条件为：抗原包被浓度2.5 μg·mL-1，血清稀释度1∶100，二抗稀释度1∶120 000。结果判定标准为待检样品OD450 nm值≥标准阳性值×20.34%为阳性，反之为阴性。重复性试验变异系数 < 10%，与多种病毒阳性血清无交叉反应。该方法具有良好的敏感性、特异性及重复性，适用于LSD感染临床血清样品检测和疫苗免疫效果评价。

关键词：牛结节性皮肤病,ORF002,原核表达,间接ELISA

基金资助：“十四五”国家重点研发计划(2023YFD1802501)；兰州市科技计划项目(2023-1-38)；国家自然科学基金面上项目(32473069)；甘肃省科技重大专项(23ZDNA007)；国家动物疫情监测与防治专项(125161031)