基于CRISPR-Cas12i技术构建XIST基因敲除的华西牛成纤维细胞系

来源：畜牧兽医学报杂志2025年第11期北京时间：

作者：张留哲, 赵佳男, 张丽琼, 张裕荣, 唐露, 李俊良, 郭慧慧

单位：1. 山西农业大学动物科技学院, 太谷 030800；2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

摘要：旨在利用Cas12iHIFI基因编辑技术获得敲除XIST基因华西牛成纤维细胞系。本研究使用健康成年种公牛22284#的耳缘成纤维细胞作为供体，针对牛XIST基因设计多组sgRNA，验证效率后选取6对高效的sgRNA组成3个方案进行试验，每个方案收集15份九十六孔板细胞，通过电转染方式介导基因编辑，最后使用突变细胞验证出使用的sgRNA没有出现脱靶情况。结果表明，成功构建了XIST敲除的华西牛成纤维细胞模型。试验共获得5株纯合突变细胞系及1株杂合细胞系，验证了Cas12i在高GC含量重复序列中的高效编辑能力。该研究为解析牛XCI机制及提高克隆胚胎发育效率提供了重要的试验材料和理论依据。

关键词：X染色体失活,XIST基因,重复序列,基因编辑,CRISPR/Cas12i

基金资助：科技创新2030-重大项目(2023ZD04048)