布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

来源：畜牧兽医学报杂志2026年第1期北京时间：

作者：彭海涛, 高阳, 刘雨欣, 顾德媛, 张东, 张如, 许会会, 陈思, 杨艳玲

单位：中国农业科学院特产研究所，长春 130000

摘要：旨在建立一种经济高效的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法，用于布鲁菌感染的动物及动物产品的快速检测并区分牛种布鲁菌和其他种布鲁菌感染的动物，为临床常的疫苗和研发的新型疫苗提供科学有效的鉴别诊断方法。本研究根据GenBank公布的galU和Omp31的序列设计检测引物和探针，构建重组质粒，对方法特异性、灵敏性及重复性评价，检测实验室制备和临床动物布病血清及组织样品。结果表明，成功建立了布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法，该方法最低检测限为1.93×100 copies·μL-1，与其他革兰阴性菌无交叉反应，批内及批间变异系数均小于2%。利用本研究建立的方法检测实验室制备样品和临床采集样品共156份，与BCSP31-PCR相比，两者阳性符合率为69.75%；与PCR和虎红凝集试验相比，灵敏性更高，双重TaqMan荧光定量PCR的敏感性为100%，PCR的敏感性为69.75%，虎红凝集试验的敏感性为58.65%。本研究建立的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法，为布鲁菌临床鉴别检测、流行病学调查及净化提供技术支持。

关键词：布鲁菌,双重TaqMan荧光定量PCR,检测方法,鉴别诊断

基金资助：“十四五”国家重点研发计划(2023YFD1800703);“十四五”国家重点研发计划(2023YFD1802501);中国农业科学院重大科技任务项目(CAAS-ZDRW202410);吉林省发展与改革委员会基本建设资金产业技术与开发专项(2024C015-3)