Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达

来源：土壤学报杂志2007年第4期北京时间：

作者：管莉菠,蔡天明,李波,何健,李顺鹏,崔中利

单位：管莉菠，南京农业大学生命科学学院微生物学系南京农业大学农业环境微生物工程重点开放实验室, 南京 210095；,蔡天明，南京农业大学生命科学学院微生物学系南京农业大学农业环境微生物工程重点开放实验室, 南京 210095；,李波，南京农业大学生命科学学院微生物学系南京农业大学农业环境微生物工程重点开放实验室, 南京 210095；,何健，南京农业大学生命科学学院微生物学系南京农业大学农业环境微生物工程重点开放实验室, 南京 210095；,李顺鹏，南京农业大学生命科学学院微生物学系南京农业大学农业环境微生物工程重点开放实验室, 南京 210095；,崔中利，南京农业大学生命科学学院微生物学系南京农业大学农业环境微生物工程重点开放实验室, 南京 210095；,

摘要：以一株高效聚磷菌Pseudomonas putidaGM6为研究材料.为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphos-phate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约528 bp).随后采用快速染色体步移方法(Self-formed adap-tor PCR,SEFA-PCR)技术扩增片段的上下游基因序列,将三个序列拼接,用OMIGA软件分析其ORFs,推测ppk基因全长为2220 bp(GenBank accession number DQ133537).构建的多聚磷酸盐激酶表达菌株E.coliBL21(DE3)/pET29a-ppk经IPTG诱导后3 h时,明显出现分子量约为81kDa的表达产物.且表达菌株在12h时的磷去除率高达80%(对照菌株的磷去除率仅为18%),远高于已报道的40%的去除率.这表明ppk基因在E.coli中的过量表达,导致了E.coli菌体中poly-P的大量聚集,从而大大去除了培养基中的磷酸盐.

关键词：多聚磷酸盐激酶;ppk全基因及上下游序列;快速染色体步移方法(SEFA-PCR)

基金资助：*江苏省环境保护厅项目(2004007);江苏省社会发展项目(BS2003028)资助