北方黑土土壤细菌16S rDNA扩增体系的优化

来源：土壤学报杂志2008年第2期北京时间：

作者：李秋红,吴凤芝

单位：李秋红，东北农业大学园艺学院, 哈尔滨 150030；,吴凤芝，东北农业大学园艺学院, 哈尔滨 150030；fzwu2006@yahoo.com.cn,

摘要：采用降落PCR方法扩增目的基因,设计两次正交试验对PCR反应体系中的各组分浓度进行筛选,同时对退火时间、延伸时间及循环次数进行摸索.结果表明,适合北方黑钙土土壤细菌16S rDNA扩增体系为:在25μl体系中,10×buffer2.5μl,DNA模板20ng,Mg2+2.5mmolL-1,dNTPs0.25mmolL-1,引物0.3μmolL-1,TaqDNA聚合酶1.5U.降落PCR扩增程序为:95℃,5min;95℃,45s;65~56℃,60s;72℃,90s;每两个循环降低1℃.95℃,45s;5.5℃,60s;72℃,90s;10个循环.最后72℃,10min.

关键词：土壤细菌16S rDNA;降落PCR;优化

基金资助：国家自然科学基金项目(N0:30571264,30230250)资助