培养方法对土壤可培养细菌多样性的影响

来源：土壤学报杂志2009年第6期北京时间：

作者：王萍,崔中利,刘标,孙波,曹慧

单位：王萍，南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室；,崔中利，南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室；,刘标，国家环境保护部南京环境科学研究所；,孙波，中国科学院南京土壤研究所；,曹慧，南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室；,

摘要：提高土壤微生物的可培养性，获得纯培养微生物菌株，是微生物生态学研究的基础。采用三种培养基对土壤细菌进行分时段计数，以细菌通用引物扩增细菌16S rDNA片段，用限制性内切酶 Hha I酶切PCR产物，对酶切图谱进行分型，研究不同培养方法对土壤细菌多样性和可培养的影响。结果表明，LB、CSEA、WSA培养基192 h后每g干土获得的细菌数量分别为14.84×107、10.27×107和6.91×107CFU，但微生物多样性指数以WSA为最高，LB多样性指数最低；三种培养基培养的细菌菌群有一定的相似性，LB和CSEA培养基间的Jaccard指数为57.69%，LB和WSA培养基之间为53.13%，而CSEA和WSA培养基的相似性指数达66.67%；16S rDNA测序结果表明，所获得的土壤细菌优势种群在分类方面主要属于γ-和β-变形杆菌以及放线菌亚门，其中某些OTUs中的16S rDNA序列与Burkholderiaceae bacterium、Rhodococcus和Mycobacterium属具有较高的同源性，推测其细胞能够分泌复苏促进因子，有效地提高土壤细菌的可培养性．

关键词：微生物多样性;可培养性;RFLP分析;培养基;培养时间

基金资助：国家自然科学基金项目（40871125, 40871123）、环保公益性行业科研专项（200709047）和江苏省自然科学基金项目（BK2006501）资助