基因宏阵列和荧光定量PCR方法对西瓜枯萎病害土壤中尖孢镰刀菌的快速检测和定量

来源：土壤学报杂志2010年第4期北京时间：

作者：赵爽,罗佳,凌宁,徐大兵,朗娇娇,胡江,沈其荣

单位：赵爽，南京农业大学资源与环境科学学院；江苏省固体有机废弃物资源化高技术研究重点实验室；2006103112@njau.edu.cn,罗佳，江苏省固体有机废弃物资源化高技术研究重点实验室；,凌宁，江苏省固体有机废弃物资源化高技术研究重点实验室；,徐大兵，江苏省固体有机废弃物资源化高技术研究重点实验室；,朗娇娇，江苏省固体有机废弃物资源化高技术研究重点实验室；,胡江，南京农业大学资源与环境科学学院；江苏省固体有机废弃物资源化高技术研究重点实验室；,沈其荣，南京农业大学资源与环境科学学院；江苏省固体有机废弃物资源化高技术研究重点实验室；,

摘要：采用基因宏阵列（Macroarray）和荧光定量PCR (Real-time PCR)的方法，对引起西瓜枯萎病害的病原菌尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）进行了快速监测和快速绝对定量，并且对实验条件进行了优化和摸索。结果显示，在西瓜枯萎病害发病较为严重的处理N-+P-和N-+P+的根际土壤中，Macroarray检测到强烈的阳性信号，表明尖孢镰刀菌的大量存在，同时荧光定量PCR的结果也表明在这两个处理的根际土壤中尖孢镰刀菌数量最多，分别为每g土壤8.89×105和2.24×105个拷贝数；而在未发生枯萎病害的处理N++P-和N++P+中，Macroarray未检测到阳性信号，根际土壤中尖孢镰刀菌数量分别为每g土壤6.23×103和3.28×103个拷贝数；而四个处理的土体土壤中尖孢镰刀菌的数量均维持在每g土壤102～103个拷贝数， Macroarray未检测到阳性信号。与传统检测方法如病原菌的分离培养、平板稀释计数等相比，上述分子生物学方法对病原真菌的检测和定量更为准确快速、省时省力。

关键词：尖孢镰刀菌;基因宏阵列;实时荧光定量PCR;SYBR Green I

基金资助：国家自然科学基金项目(40871126)资助