出芽短梗霉ATMT体系构建及聚苹果酸高产菌株筛选

来源：食品工业科技杂志2025年第21期北京时间：

作者：白丽君, 杜榕, 贾宜萱, 陶佩, 魏培莲

摘要：本研究基于优化根癌农杆菌介导转化技术（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation，ATMT），构建出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）遗传转化体系，旨在筛选高产聚苹果酸菌株。通过优化农杆菌初始浓度、预培养时间、共培养时间、共培养pH、乙酰丁香酮（AS）浓度、共培养温度等关键参数，利用潮霉素磷酸转移酶（hph）基因和增强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因作为筛选标记，从中筛选出高产聚苹果酸的出芽短梗霉菌株。最佳转化条件为：农杆菌初始OD600值为0.6、预培养时间为8 h、共培养时间为72 h、共培养pH为5.2、AS浓度为100 μmol/L，共培养温度为22 ℃。在优化条件下，成功构建了一批具有稳定T-DNA插入的转化菌株，其中高产突变株的聚苹果酸产量相比野生型菌株显著提升，最高提高74.59%。本研究为聚苹果酸工业化生产的菌株优化提供了重要的技术支持，并为其他工业微生物的遗传改造提供了宝贵的参考路径。

关键词：出芽短梗霉,根癌农杆菌,增强型绿色荧光蛋白,遗传转化,聚苹果酸,