亚硝酸还原酶基因克隆、表达与纯化

来源：食品工业科技杂志2017年第14期北京时间：

作者：魏计东, 张庆芳, 窦少华, 于爽, 迟乃玉, 王晓辉

摘要：该研究通过聚合酶链反应（PCR）方法从木糖氧化产碱菌（Achromobacter xylosoxidans DL-1）基因组DNA中成功克隆含铜亚硝酸还原酶基因。PCR测序表明该基因全长1083个核苷酸,编码360个氨基酸,预测其理论分子质量约38.924 k Da,等电点（p I）4.83,命名为Cu NiR（Genbank登录号KX674378）。结构域分析该蛋白编码区包含信号肽,1个铜离子结合位点,1个氧化还原酶催化域。将Cu NiR基因构建到p ET22b载体,并转化至大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）BL21（DE3）中诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测显示目的蛋白可溶表达。利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,酶活检测显示比活力为123.82 U/mg,为后期含铜亚硝酸还原酶（Cu NiR）的生化性质表征奠定理论基础。

关键词：木糖氧化产碱菌DL-1,含铜亚硝酸还原酶(CuNiR),克隆,表达,纯化,