新型食品添加剂γ-聚谷氨酸合成酶基因的克隆及表达

来源：食品工业科技杂志2017年第03期北京时间：

作者：王风青, 梁金钟, 毕明月, 肖玮

摘要：γ-聚谷氨酸（γ-poly glutamic acid,γ-PGA）特殊的分子结构,使其具有很好的乳化、增稠、抗冻等特性,可作为添加剂广泛应用于食品当中。实验以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 115基因组为模板,通过PCR技术成功克隆到γ-PGA合成酶系基因pgs BCA,并进行测序,利用Ex PASy-Prot Param tool、Server 3.0 Signal P,TMHMM Server和Tmpred,PSORTB,Predict Protein,Swiss-Model Workspace软件,分别对蛋白质的生物信息进行了分析和预测,针对γ-PGA合成关键酶基因pgs B构建了表达体系,结果表明:pgs B,pgs C和pgs A基因分别含1182、450和1143个核苷酸,分别编码393、149和380个氨基酸,其对应蛋白均不存在信号肽,属于非分泌型蛋白;Pgs B、Pgs C和Pgs A分子量分别为44016.7、16302.9、42759.8 Da;Pgs B为亲水性不稳定的酸性蛋白质,二级结构以α-螺旋为主;Pgs C是疏水碱性的膜结合蛋白,存在4个强跨膜区;Pgs A为亲水稳定的碱性蛋白,在N端存在1个强跨膜区域。经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测,pgs B基因被成功表达,目的蛋白相对分子质量约为45 k Da,与预测值基本相符。

关键词：Bacillussubtilis115,γ-PGA,pgsBCA基因克隆,生物信息分析,诱导表达,