Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51和Asp69定点突变对酶活性的影响

来源：食品工业科技杂志2016年第16期北京时间：

作者：孙玉英, 严翠, 王淑军, 张继泉, 赵宏, 赵斌元

摘要：为确定Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶特定氨基酸与酶活性间的关系,以含壳聚糖酶基因的p CT7-CHISP6H-m Mschito质粒为模板,利用反向PCR的方法对壳聚糖酶两个可能的酶活性位点Glu51（突变成Gln51）和Asp69（突变成Asn69）进行突变,从而构建了两个单位点突变,突变质粒分别转化至Escherichia coli BL21（DE3）并经IPTG诱导表达,测定突变前后酶的比活性,突变酶（Asp69→Asn69）比活力与野生型相比几乎不变,而突变酶（Glu51→Gln51）比活力大约为野生型的10%。通过测定动力学常数发现,突变酶和天然酶Km几乎没有很明显的变化,但是突变酶（Glu51→Gln51）的Vmax与上述两种酶的Vmax相比有很明显的变化。采用DNA Star和Deep view分析软件,预测突变前后壳聚糖酶的二级结构和三级结构,结果表明,Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51极有可能是维持酶的催化活力的必需氨基酸,它的突变可能导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变,从而导致酶活力的丧失。

关键词：壳聚糖酶,定点突变,比活力,必需氨基酸,