利用RNAi抑制cre1基因转录提高里氏木霉表达纤维素酶

来源：食品工业科技杂志2016年第11期北京时间：

作者：王榕, 宫莉, 姚斌, 薛鲜丽, 罗会颖, 张永杰, 苏小运

摘要：本研究采用RNA干扰技术（RNAi）对里氏木霉主要的转录抑制因子cre1基因的表达进行抑制,以期提高里氏木霉生产纤维素酶的能力。通过PCR,从里氏木霉的基因组中扩增得到cbh1启动子、反向的cre1基因片段（568963 bp）、正向的cre1基因片段（655961 bp）和cbh2终止子,利用DNA assembler方法将这些基因连接到pRS424质粒上,构建成p Cre1-i质粒。再将RNAi盒分作两个片段扩增,同时转化里氏木霉并通过PCR鉴定阳性转化子。摇瓶发酵显示其中一株转化子在纤维素诱导培养基中培养4.5 d后,其纤维素酶的滤纸酶活、内切葡聚糖酶活和CBHI酶活为0.67、3.70和0.46 U/m L,较出发菌株分别提高了1.3、1.8和5.6倍。通过实时荧光RT-PCR检测,发现该转化子中cre1基因的转录水平比出发菌株降低了43%。

关键词：cre1,RNAi,纤维素酶,DNAassembler,