四川泡菜中植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因克隆与表达

来源：食品工业科技杂志2015年第15期北京时间：

作者：董维, 陈安均, 韩国全, 蒲彪, 罗惟, 侯晓艳

摘要：目的:对植物乳杆菌中亚硝酸盐还原酶基因进行克隆并表达,并测定酶的活力。方法:根据Gen Bank中亚硝酸盐还原酶（NIR）基因序列,设计引物。提取植物乳杆菌的DNA,采用PCR技术扩增nir基因,TA克隆构建获得重组质粒p MD19-nir,分析其核苷酸序列同源性。通过双酶切连接到表达载体p ET-32a（+）中,获得重组表达载体p ET-32a-nir,构建成功后转化到E.coli BL（DE3）中进行表达研究。经IPTG诱导表达,得重组蛋白,超声波破碎,提取粗酶液,测定酶活力。结果:克隆的目的基因序列长度为1638 bp。获得重组蛋白分子量为80 ku,酶活力为4.2 U/mg。结论:成功克隆了植物乳杆菌中的亚硝酸盐还原酶基因,成功的导入到E.coli BL（DE3）中,表达产物有酶活。

关键词：亚硝酸盐还原酶,克隆,基因表达,植物乳杆菌,