单核细胞增多症李斯特菌InlC 基因缺失株的构建与鉴定

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2015年第1期北京时间：

作者：袁兆尤, 马勋

单位：石河子大学动物科技学院，石河子 832003

摘要：为探讨单核细胞增生性李斯特菌（Lm）InlC基因在Lm致病性中的作用，本研究对其进行缺失。以单核细胞增多症李斯特菌4b血清型临床分离株LM-90SB２DNA为模板，扩增出用于缺失InlC基因的上、下游同源臂。运用SOE-PCR技术，将上、下游同源臂融合扩增得到△InlC基因缺失片段。将△InlC基因缺失片段与自杀性质粒pKSV-7连接，构建pKSV7-△InlC质粒。电转pKSV7-△InlC于LM-90SB２感受态细胞中，经过10μg/mL氯霉素和41℃下连续传代15代，获得单交换重组株，然后在41℃氯霉素中传至第108代，获得双交换重组株，菌液用旁侧引物进行PCR鉴定，然后30℃无氯霉素条件下连续传代培养30代丢失自杀性质粒并检测其遗传稳定性。结果显示：获得LM90SB２-△InlC缺失突变株，旁侧引物扩增只有1条1480bp大小的片段，同时，对缺失片段进行测序验证，结果表明成功对InlC基因进行了缺失，并且缺失株遗传稳定。LM90SB２-△InlC的构建为进一步研究InlC基因在LM毒力中的作用奠定了基础。

关键词：单核细胞增多症李斯特菌；基因缺失；同源重组；InlC 基因；电转化

基金资助：国家自然科学基金项目（31160506），人力资源和社会保障部留学回国人员科技活动项目（RSLX201302）