单核细胞增生性李斯特菌 srtA 基因的克隆与原核表达

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2015年第2期北京时间：

作者：吴学林, 曹树珠, 马勋

单位：（石河子大学动物科技学院预防兽医学重点实验室，石河子 832003）

摘要：为了探究从新疆发病绵羊中临床分离的单核细胞增多性李斯特菌（简称LM90SB2）srtA基因的特异性及其在原核表达质粒pET32a中的表达，本研究利用PCR技术扩增LM90SB2的srtA基因，测序后并进行序列比对分析，将其克隆到原核表达质粒pET32a中构成重组表达质粒pET32a-srtA。重组质粒转化入大肠杆菌BL21（DE3）中，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导使其表达，SDS-PAGE电泳检测，同时采用Western-blotting对表达产物进行了鉴定。结果表明：SrtA蛋白在BL21（DE3）中大量表达，表达产物经SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测分析其为1个分子量为47ku的融合蛋白，与预期的大小相符合，成功的构建了重组质粒pET32a-srtA，并使其在BL21（DE3）中获得了高效的表达。本研究为下一步研究其对李斯特菌致病性的影响及制备单克隆抗体奠定了基础。

关键词：单增李斯特菌；pET32a；srtA 基因；原核表达；

基金资助：国家自然科学基金项目（31360614）