猪链球菌乳酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的反应原性研究

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2015年第2期北京时间：

作者：高明明 , 王淑杰 , 王俊 , 金家民 , 张璐 , 刘永刚 , 李爱东 , 陶冶 , 李莉 , 姜成刚 , 王刚 , 申红

单位：（1 石河子大学动物科技学院，石河子 832003；2 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 /动物疫病诊断及技术服务中心，哈尔滨 150001；3 北京市畜牧总站，北京 100107）

摘要：为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性，本实验采用克隆表达的方法对其进行研究。根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列，并设计特异性引物，对乳酸脱氢酶基因进行扩增，克隆入pET30a载体，构建重组质粒pET30a-LDH，测序后转化入大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌，SDS-PAGE和Westernblot分析表达产物。SDS-PAGE分析结果显示表达的重组融合蛋白相对分子量为41ku；Westernblot分析结果显示该重组蛋白可与7型猪链球菌WH分离株多克隆抗体发生特异性血清学反应。这表明表达的重组LDH蛋白具有良好的反应原性，为预防和控制猪链球菌病提供有效的疫苗候选分子奠定基础。

关键词：猪链球菌；乳酸脱氢酶；反应原性；原核表达

基金资助：国家自然科学基金项目（31060281），国家科技重大专项（2012ZX10004214