结核分枝杆菌标准株 H37Rv mazEF3 基因过表达菌株的构建及初步鉴定

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2016年第1期北京时间：

作者：屈艳琳, 赵继利, 刘微, 申爱平, 曹帅丽, 袁俐

单位：（石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室，新疆 石河子 832002）

摘要：为构建H37RvmazEF3基因的过表达菌株，检测过表达菌株mazEF3mRNA表达水平。使用穿梭质粒pMV361，把mazEF3基因连入其中，构建重组质粒pMV361-mazEF3；利用电穿孔技术，将穿梭表达质粒导入H37Rv中，并将该菌涂在卡那霉素培养基上初步筛选，提取阳性菌株质粒进行PCR、双酶切后送公司测序进一步验证；检测不同电转电压下mazEF3mRNA表达水平，寻找最佳电转电压。结果显示，成功构建H37RvmazEF3基因的过表达菌株，PCR、双酶切后目的基因，测序结果与已知mazEF3基因比对，同源性100%。实时荧光定量检测，电转电压为2300V时，构建的过表达菌株mazEF3mRNA表达量最高。由此可知，成功构建及初步鉴定了mazEF3mRNA过表达菌株，电转电压为2300V时，构建的过表达菌株mazEF3mRNA表达量最高。

关键词：结核分枝杆菌；mazEF3；毒素 - 抗毒素系统；过表达

基金资助：国家自然科学基金项目（81341079，81560262）