羊种布鲁氏菌新疆流行株 015 株 sodc 基因缺失株的构建与初步评价

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2016年第1期北京时间：

作者：易德武 , 张俊波 , 王远志 , 李默 , 李爽 , 张欢 , 王杰 , 陈创夫

单位：（1 石河子大学动物科技学院 / 新疆地方与民族高发病教育部重点实验室，新疆 石河子 832003；2 铜仁学院生物与农林工程学院，贵州 铜仁 554300；3 石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室，新疆 石河子 832002）

摘要：为了构建布鲁氏菌015sodc基因缺失株，本研究采用PCR方法以热灭活的羊种布鲁氏菌新疆流行株015为模板，分别扩增sodc基因的上下游同源臂序列；以枯草芽孢杆菌为模板，扩增SacB基因，将扩增序列分别连至克隆载体pMD19-Tsimple上并测序，然后在双酶切后将上下游同源臂序列连接至自杀载体pGEM-7Zf+上，分别得到了pGEM-7zf-Δsodc，再将SacB基因单酶切后连接至上述载体上，构建成同源重组自杀质粒pss。经8%蔗糖平板筛选鉴定SacB基因的活性。将构建好的自杀质粒分别电转化至布鲁氏菌015感受态细胞中，通过氨苄抗性筛选和8%蔗糖敏感筛选后获得了015Δsodc基因缺失株。对获得的基因缺失株进行PCR鉴定和遗传稳定性检测。通过检测侵染小鼠巨噬细胞cfu、缺失株免疫小鼠后体内IgG，IFN-γ的水平，及脾脏cfu，对其毒力进行了初步评价。结果表明，该缺失株20代内未发生回复性突变，成功构建了具有非抗性基因标记的缺失株，并且015Δsodc细胞cfu、脾脏cfu，及IFN-γ的水平都显著低与亲本株015，说明毒力与亲本株相比有一定程度的下降。本研究可为今后布鲁氏菌致病机理及新疫苗的研究提供实验材料。

关键词：布鲁氏菌；sodc 基因；缺失株

基金资助：国际科技合作项目（2013DFA32380），国家大学生 SRP 项目（201510759063）