变溶菌素（Mutanolysin）酶解单核细胞增多性李斯特菌细胞壁条件的优化

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2016年第4期北京时间：

作者：丁剑, 曹树珠, 陈朔, 马勋

单位：丁剑，曹树珠，陈朔，马勋 *

摘要：为了最大效率提取单核细胞增多性李斯特菌LB90SB2细胞壁表面蛋白，本研究对变溶菌素浓度和酶解时间进行了优化。选择20、60μg/mL的变溶菌素浓度进行30min-4h，37℃酶解以及37和4℃低温联合酶解，通过测定酶解前后OD600和CFU，判断细胞膜完整性和计算原生质体形成率，筛选最佳酶解浓度和酶解时间。在最佳酶浓度的条件下，测定不同酶解时间细胞壁蛋白提取物浓度。结果表明：在酶解30min-4h，原生质体形成率从0提高至91.00%，细胞壁蛋白浓度从0.272增加至1.735mg/mL。△OD600在1.86%-14.50%变动，但△OD600的统计学处理差异不显著。60μg/mL变溶菌素作用4h的原生质体形成率达到91.00%，远高于20μg/mL变溶菌素作用4h的78%。最终确定变溶菌素浓度为60μg/mL，酶解时间4h为酶解LM90SB2细胞壁的最佳条件。本研究为下一步研究细胞壁表面蛋白奠定基础。

关键词：LM90SB2；原生质体；制备；变溶菌素

基金资助：国家自然科学基金项目（31160506）