绵羊 oar-miR-200b 对 GNAQ 基因的表达调控

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2016年第4期北京时间：

作者：于要升, 林杉, 王开胜, 雷小萍, 梁慧慧, 杨恒, 赵宗胜

单位：（石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003）

摘要：为了探讨miR-200b是否通过靶向作用GNAQ基因并以此调控发情过程，本研究通过双荧光素酶报告基因系统，验证miR-200b对靶基因GNAQ的真实干扰作用，并在下丘脑神经细胞和卵巢颗粒的细胞中过表达miR-200b，用荧光定量PCR检测了GNAQ下游基因的表达变化。结果显示：共转染GNAQ-3'UTR-psi-CHECKTM-2和pri-miR-200b-pcDNA3.1(+)组的hela细胞荧光素酶值是只转染psi-CHECKTM-2组的77.5%，其余两组与只转染psiCHECKTM-2组之间的差异无统计学意义。通过miR-200b干扰载体转染下丘脑神经细胞，选择GNAQ下游基因ITPR、PRKCB、GNA1、CREB、MAP3K1、GPR54、KISS1及GnRH进行实时荧光定量检测，结果发现：miR-200b干扰组和对照组相比，GNAQ基因显著下调，下游ITPR、PRKCB、GNA1和MAP3K1、发情关键基因GPR54、KISS1和GnRH显著上调。通过miR-200b干扰载体转染卵巢颗粒细胞，选择GNAQ下游基因COMT、HSD3B1、CYP1A1和PKA基因进行表达量验证，结果表明：miR-200b干扰后，GNAQ基因表达量升高，下游基因COMT、HSD3B1、CYP1A1和PKA表达量下降。由此推测，miR-200b真实靶向调控GNAQ基因，进而调控发情过程。

关键词：绵羊；miR-200b；下丘脑；卵巢

基金资助：国家自然科学基金项目（1100902）