人脑微血管内皮细胞 ACTG1 基因真核表达载体的构建及表达

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2016年第6期北京时间：

作者：曹树珠, 马勋 , 陈朔, 丁剑

单位：（石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003）

摘要：为了构建人脑微血管内皮细胞ACTG1基因的真核表达载体及在HEK293细胞中的表达，本研究采用RT-PCR方法，以单增李斯特菌侵染的人脑微血管内皮细胞提取的总RNA为模板，扩增ACTG1基因片段，TA克隆后经SalI和EcoRI双酶切、测序等鉴定重组质粒，重组质粒再经双酶切，与真核表达载体pACGFP连接，酶切鉴定后，Lipofactamine2000转染HEK293细胞，荧光显微镜检测绿色荧光；同时采用Western-blotting对表达产物进行了鉴定。结果表明：PCR扩增得到1128bp的ACTG1基因片段，ACTG1-pACGFP真核表达载体构建成功，转染24h后，在荧光显微镜下可见绿色荧光，Western-blotting检测分析，其分子量约为68kDa的融合蛋白，与预期的大小相符合，表明重组蛋白表达成功，本研究为单增李斯特菌与脑微血管内皮细胞cDNA文库中相互作用蛋白的筛选和鉴定奠定了基础。

关键词：人脑微血管内皮细胞；ACTG1 基因；pACGFP；HEK293 细胞；单增李斯特菌

基金资助：国家自然科学基金项目（31160506）