布鲁氏菌 IV 型分泌系统蛋白基因 VceA 的原核表达、纯化及功能分析

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2017年第1期北京时间：

作者：史静雪, 刘来珍, 李敏, 荆明龙, 刘洋, 张豫, 刘航, 张辉

单位：（石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室，新疆 石河子 832003）

摘要：本研究对布鲁氏菌分泌蛋白VceA基因进行了原核表达与纯化，并分析其反应原性，致炎特性和分子特性。应用PCR技术从布鲁氏菌2308基因组中扩增VceA基因，亚克隆至PMD19-T载体后，进行测序，构建重组表达质粒PGEX-4T-1-VceA，然后转化至E.coliBL21（DE3）表达菌中，IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析，WesternBlot检测其反应原性；用重组蛋白作用于细胞，检测炎症相关细胞因子的分泌量；并对该蛋白进行生物信息学分析。结果显示：PCR扩增出VceA基因，SDS-PAGE显示纯化的VceA融合蛋白大约在37kD处，WesternBlot也出现了杂交带。细胞实验表明重组蛋白刺激细胞后产生的IL-18，IL-1β，TGF-β1的含量均显著高于BSA对照组（P<0.05）。生物信息学分析显示，该蛋白无跨膜区结构，存在信号肽，属于分泌型蛋白，二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主，并利用Phyre2软件成功构建了该蛋白的三维模型。结果表明，成功克隆并表达了布鲁氏菌VceA蛋白，该蛋白具有良好的反应原性，并具有致炎作用。这为进一步研究布鲁氏菌分泌蛋白的致病机制奠定了基础。

关键词：布鲁氏菌；IV 型分泌系统；VceA 基因；细胞因子

基金资助：国家自然科学基金项目（31402166），国际科技合作项目（2013BC005）