Kozak 序列对 nNOS 基因表达及神经细胞分化的影响

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2017年第2期北京时间：

作者：李巧彦, 刘宗智, 张婷, 田云云, 张倩, 谢建新, 王铁鹏

单位：（石河子大学医学院生物化学教研室 / 新疆地方与民族高发病教育部重点实验室，新疆 石河子 832000）

摘要：为探讨Kozak调控序列对nNOS(neuronalnitricoxidesynthase，神经型一氧化氮合酶)基因表达的影响，并验证其在神经细胞分化过程中的作用。构建了含有经典Kozak序列调控元件及野生型前导序列的人源nNOS表达载体；通过qPCR和westernblot技术检测不同表达载体在SH-SY5Y细胞中的转录水平和翻译效率；利用SH-SY5Y神经细胞的诱导分化模型进一步验证不同的nNOS表达调控序列对于神经细胞分化的影响；通过测量和定量神经突起长度，结合qPCR法定量神经细胞分化关键标志物Tau和MAP2的表达来表征神经细胞分化程度。结果显示，经典Kozak调控元件（-3位A和G）和野生型前导序列（含-3位A）都能显著提高nNOS载体的表达效率，其中，野生型序列效率更高，但Kozak元件和野生型序列均不影响nNOS转录。在SH-SY5Y神经细胞分化模型中，Kozak元件也能促进分化进程，野生型序列的促分化作用最强。由此可知，通过对比不同调控序列，获得了以野生型序列引导的nNOS高效表达载体。Kozak元件对不同基因的调节效果差异较大，针对特定基因，有必要通过详细的对比实验确认最佳调控序列。

关键词：Kozak 序列；nNOS；神经细胞分化；Tau；MAP2

基金资助：国家自然科学基金项目（81460202），新疆兵团重点领域科技攻关项目（2014BA041），生物大分子国家重点实验\r\n室开放课题（2013kf07)