STIM1/ORAI1 复合体参与调节人脐静脉内皮细胞SOC 和 ROC 介导的钙内流和 NO 生成

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2017年第3期北京时间：

作者：王腊梅 , 胡清华 , 钟 华 , 唐娜 , 孙志萍 , 何 芳 ,

单位：（1 新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室 / 石河子大学医学院病理生理教研室，新疆 石河子 832002；2 石河子大学医学院医学教学实验中心，新疆 石河子 832002；3 华中科技大学同济医学院病理生理学系 / 卫生部呼吸系疾病重点实验室，湖北 武汉 430030）

摘要：为研究基质交联分子1(STIM1)/钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)介导Ca2+内流和NO生成中的作用。采取2-3代HUVECs随机分组，将构建的STIM1和ORAI1干扰质粒分别转染入HUVECs。用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果，Real-timePCR和Westernblotting检测STIM1、ORAI1mRNA和蛋白的表达。细胞随机分组：特异性质粒转染组即实验组，未转染组即空白对照组(Control组)及空质粒组(Scrambled组)，将上述3组细胞分别与四种不同处理因素刺激后用荧光探针Fura-2/AM检测[Ca2+]i变化，NO荧光探针DAF-FM负载方法同步检测NO生成的变化。随后将构建的STIM1和ORAI1干扰质粒同时转染入HUVECs，与CaR激动剂精胺孵育后检测[Ca2+]i和NO，用免疫共沉淀法检测STIM1和ORAI1的相互作用。结果显示，(1)与对照组相比，STIM1及ORAI1组，mRNA和蛋白表达均明显降低(P＜0.05)；(2)在4种不同处理因素作用下，STIM1及ORAI1转染组中[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05)；(3)与对照组及单转染STIM1及ORAI1组比，共转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05)；(4)STIM1与ORAI1相互作用形成复合体，且在CaR激动剂的剌激下相互作用增强。由此可知，STIM1与ORAI1复合体共同调节CaR经SOC和ROC激活介导的Ca2+内流和NO生成。

关键词：STIM1；ORAI1；一氧化氮；钙离子；人脐静脉内皮细胞

基金资助：国家自然科学基金项目（31160239，81160018）