卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感染神经元细胞 SH- SY5Y的特点研究

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2017年第6期北京时间：

作者：曹冬冬 , 李英 , 张慧 , 谭晓华 , 杨磊 , 潘泽民 , 李冬妹

单位：（1 新疆地方与民族高发病教育部重点实验室 / 石河子大学医学院生物化学教研室，新疆 石河子 832002；2 新疆维吾尔自治区人民医院临床医学研究中心，新疆 乌鲁木齐 830001；3 杭州师范大学医学院，浙江 杭州 310036）

摘要：为检测卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi'ssarcomaassociatedherpesvirus,KSHV）是否能够直接感染神经元SH-SY5Y细胞，分析病毒相关基因的表达水平和细胞增殖情况等特点，为进一步研究KSHV感染在中枢神经系统疾病中的作用提供依据。采用佛波酯（12-O-Tetradecanoylphorbol13-acetate,TPA）从BCBL1细胞中诱导并提取有感染性的KSHV病毒，感染神经元细胞SH-SY5Y，48h后显微镜下观察细胞形态变化。提取感染细胞的RNA，通过RT-PCR技术检测裂解态的ORF26和潜伏态的潜伏相关核抗原（LatencyAssociatedNuclearAntigen,LANA）的mRNA表达水平，通过免疫荧光检测LANA蛋白的表达水平，验证KSHV的成功感染，并在感染后1、3、5、7d进行细胞计数，与未感染的细胞做比较，以检测KSHV感染对细胞增殖能力的影响。结果显示，显微镜下观察KSHV感染与未感染的SH-SY5Y细胞形态，见未感染的SH-SY5Y细胞呈梭形聚团生长，感染KSHV后，细胞变大，形态变圆，倾向于分散生长。RT-PCR检测发现ORF26和LANA在KSHV感染的SH-SY5Y细胞中均有表达。由此可知，免疫荧光检测到LANA蛋白在细胞中也有表达，这些结果确定了KSHV可以成功感染SH-SY5Y细胞，并可同时表达潜伏态和裂解态的病毒基因。细胞计数结果表明KSHV感染促进了SH-SY5Y细胞的增殖能力。

关键词：卡 波 氏 肉 瘤 相 关 疱 疹 病 毒；神 经 元 细 胞；潜 伏 相 关 核 抗 原 ；ORF26

基金资助：国家自然科学基金项目（ 81760362） ，新疆兵团应用基础研究项目(2015AG015)