陆地棉（Gossypium hirsutum L.）GhWRKY75 的克隆及表达载体构建

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2018年第3期北京时间：

作者：张鹏飞, 刘戈辉, 郭文婷, 张薇

单位：（新疆绿州农业重点实验室 / 石河子大学农学院，新疆 石河子 832003）

摘要：目的从棉花抗病品种中克隆WKKY转录因子基因，为棉花抗枯萎病分子育种提供重要的基因资源。方法以枯萎病菌诱导后棉花基因表达谱中差异表达的WRKY基因片段为探针序列，以陆地棉的抗枯萎病品种'中棉所12'的根部cDNA为模板。运用电子拼接及RT-PCR技术，克隆得到一个新的基因，将该基因命名为GhWRKY75（登录号：MH138002）。结果序列分析发现，GhWRKY75基因开放阅读框全长为513bp，编码一个含170个氨基酸残基的蛋白，具有1个WRKY结构域及1个典型的C2H2型锌指结构，属于第Ⅱ类WRKY转录因子家族。该基因编码蛋白分子量为19.51kd，等电点为9.30，脂肪指数为60.12，属于疏水性蛋白，基因的蛋白二级结构由α螺旋、延伸链和无规则卷曲组成。同源基因进化树分析表明该基因与雷蒙德氏棉亲缘关系最近。结论：从棉花中克隆得到一个新的GhWRKY75基因，构建了该基因的植物过表达载体，为进一步研究该基因功能奠定了基础。

关键词：陆地棉；基因克隆；WRKY 转录因子；载体构建

基金资助：国家自然科学基金项目(31260358)