盘羊杂交羊 SP- A 基因克隆与真核表达

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2018年第3期北京时间：

作者：王继雪, 孙延鸣

单位：（石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003）

摘要：目的为了对盘羊杂交羊肺表面活性物质相关蛋白A（Pulmonarysurfactant-associatedproteinA，SP-A）基因进行克隆和真核表达。方法采集盘羊杂交羊肺组织，提取总RNA，采用RT-PCR的方法克隆SP-A基因的ORF序列，测序正确后将其亚克隆到pPIC9K载体中构建pPIC9K-SP-A真核表达质粒，再将该质粒电转入毕赤酵母GS115中并用甲醇诱导进行真核表达，最后用SDS-PAGE和westernblot检测鉴定目的蛋白。结果扩增出的基因片段经测序比对后与SP-A基因的ORF序列一致，构建的真核表达质粒pPIC9K-SP-A经双酶切和测序鉴定成功，真核表达产物用SDS-PAGE分析，可见大小为27.33kD的目的条带，westernblot鉴定也可见1条27.33kD的目的蛋白条带。结论本研究成功克隆了盘羊杂交羊SP-A基因的ORF序列并对其进行了真核表达，为后续研究SP-A蛋白的结构和功能奠定了基础。

关键词：盘羊杂交羊；肺表面活性物质相关蛋白 A；克隆；真核表达

基金资助：国家自然科学基金项目（31460686）