库尔勒香梨自交不亲和 SFBB- γ 基因 F- box 区和可变区 V3 RNAi 表达载体的构建及遗传转化

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2018年第4期北京时间：

作者：钟颖, 冯建荣 , 刘海楠, 李文慧, 吕文娟, 田雯

单位：（石河子大学农学院 / 特色果蔬栽培生理与种质资源利用兵团重点实验室，新疆 石河子 832003）

摘要：目的为在分子水平应用RNAi（RNAinterference）技术调控梨自交不亲和性状，培育自交亲和梨品种。方法基于本实验室获得的库尔勒香梨（PyrusbretschneideriRehd）自交不亲和品种花粉决定子SFBB-γ基因cDNA全长序列，选取SFBB-γ基因F-box区和可变区V3分别设计141bp和120bp的片段作为干扰序列，以棉花基因组DNA242bp的序列作为间隔片段，利用融合PCR（FusionPCR）构建SFBB-γ基因发卡结构（intron-containinghairpinRNA，ihpRNA），酶切后与pCAMBIA1304植物表达载体相连，构建SFBB-γ基因RNAi表达载体并转化至农杆菌GV3101中。利用叶盘转化法转化到库尔勒香梨无菌叶片中，用GUS组织化学染色法鉴定侵染叶片。测序结果表明干扰F-box区获得的ihpRNA臂长为141bp，茎环253bp；干扰可变区V3获得的ihpRNA臂长为120bp，茎环253bp。结果说明SFBB-γ基因F-box区和V3区的ihpRNA结构融合成功。通过双酶切检验及PCR证实，SFBB-γ基因F-box区和V3区的RNAi表达载体pCAMBIA1304-RNAi-SFBB构建成功；PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌GV3101中，GUS染色检验获得蓝色，目的基因已整合进入库尔勒香梨叶片中。结论成功构建库尔勒香梨SFBB-γ基因F-box区及可变区V3的RNAi表达载体，为诱导香梨SFBB-γ基因转录后基因沉默及培育自交亲和梨品种提供参考。

关键词：库尔勒香梨；自交不亲和；SFBB- γ 基因；F- box 区；RNAi 表达载体

基金资助：国家自然科学基金项目（31272129