一种改良后的大脑皮质神经元细胞的原代培养模型建立及鉴定

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2022年第1期北京时间：

作者：张磊, 韩延峰, 戴朝, 李阳, 胡玉奇, 陈富雷, 赵冬

单位：1 石河子大学医学院第一附属医院神经外科,新疆 石河子 832000; <br/>2 新疆生产建设兵团第十师疾病预防控制中心,新疆 北屯 836000; <br/>3 新疆生产建设兵团第十师北屯医院,新疆 北屯 836000

摘要：目的在传统的大脑皮质神经元的提取和培养方法基础上进行优化改良以获得高收率、高纯度、高质量、低死亡率、背景干净的皮质神经元细胞。方法分别采用传统的含EDTA的0.25%Trypsin分离培养的皮质神经元,与改良后用混有TrypleExpress和DnaseI的消化液,经弹拨分散、手法震荡,提前一次离心后种植培养的皮质神经元。接种后的第1、3、5、6、7d,显微镜观察细胞形态,第7d用免疫荧光法对神经元细胞进行鉴定以及检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。结果与传统的胰酶提取方法相比,改良后获得的皮质神经元生长状态更优,突触发育良好,双极神经元形态典型,杂质细胞及碎片含量少,背景干净,且具有高纯度和高存活率的特性。结论本研究在组织细胞分离消化,弹拨分散、手法震荡,提前一次离心,多重细节方面进行了探索与改良后成功建立了一种结果稳定,简单可行的皮质神经元原代培养方法,是研究神经科学领域较为理想的模型。

关键词：大脑皮质神经元,Tryple Express,神经元特异性烯醇化酶,乳酸脱氢酶,免疫荧光染色

基金资助：国家自然科学基金项目(81960222),新疆兵团中青年科技创新领军人才(2020CB011),石河子大学国际科技合作促进计划项目(GJHZ201704)