肌酸激酶CKBB在氧化应激压力下的降解机制

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2022年第3期北京时间：

作者：赵艳春, 孙悦, 张婷, 王铁鹏

单位：石河子大学医学院/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室,新疆 石河子 832000

摘要：目的神经元中的肌酸激酶CKBB是维持细胞正常能量代谢平衡的关键调节蛋白,它对神经退变神经元内的氧化应激压力敏感且含量随病变发生而降低,但其蛋白水平改变的原因尚未阐明。方法采用过氧化氢处理SH-SY5Y神经细胞,研究CKBB在氧化应激条件下的降解机制。使用MTT法对细胞活力进行检测,利用Hoechst33342染色细胞核表征细胞生存状态。使用Westernblot法对CKBB的含量进行检测。分别使用自噬抑制剂BafilomycinA1及蛋白酶体抑制剂MG-132处理细胞,验证CKBB具体降解途径。采用激光共聚焦显微镜检测胞内RFP-LC3,GFP-CKBB共定位情况。使用免疫沉淀法抓取CKBB蛋白,对泛素化修饰进行检测。结果在过氧化氢处理下CKBB含量明显下降,使用自噬抑制剂及蛋白酶体抑制剂处理对CKBB的含量均有明显挽回作用。过氧化氢处理,促进CKBB与LC3共定位,并导致CKBB泛素化修饰水平显著升高。结论CKBB在过氧化氢处理的氧化应激条件下,经由自噬及蛋白酶体两条途径发生蛋白降解。

关键词：肌酸激酶,氧化应激,神经退行性疾病,自噬,蛋白酶体

基金资助：国家自然科学基金项目(81460202)