MSMEG_0372基因敲除、回补及过表达耻垢分枝杆菌的构建与鉴定

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2022年第5期北京时间：

作者：刘仪, 牛宏红, 杨赛丽, 曹旭东, 袁俐

单位：石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室,新疆 石河子 832000

摘要：目的为研究MSMEG_0372基因的功能,构建该基因敲除、回补及过表达耻垢分枝杆菌(Mycobacteriumsmegmatis,M.smegmatis)并鉴定。方法聚合酶链反应(PCR)扩增MSMEG_0372基因的左、右臂(即等位基因互换底物,alleleexchangesubstrates,AES)。AES与p0004s经过酶切并连接,构建p0004s-AES质粒。p0004s-AES与phAE159经过酶切并连接,构建phAE159-AES噬菌粒。噬菌粒转化至M.smegmatis,30℃培养,扩增重组噬菌体。用重组噬菌体侵染M.smegmatis,37℃培养,发生基因同源重组,形成MSMEG_0372基因敲除菌株。筛选阳性菌落,PCR鉴定。PCR扩增MSMEG_0372基因,构建pMV361-MSMEG_0372质粒。将pMV361-MSMEG_0372质粒分别导入MSMEG_0372基因敲除菌株和野生型M.smegmatis,构建MSMEG_0372基因回补菌株和MSMEG_0372基因过表达菌株。筛选阳性菌落,PCR鉴定。结果PCR扩增出MSMEG_0372的左、右臂(AES),构建了p0004s-AES质粒和phAE159-AES噬菌粒,制备了高滴度的重组噬菌体并侵染M.smegmatis,从而成功构建了MSMEG_0372基因敲除菌株。构建了pMV361-MSMEG_0372质粒,成功构建了MSMEG_0372基因回补和过表达菌株。结论成功构建并鉴定了MSMEG_0372基因敲除、回补及过表达M.smegmatis,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

关键词：耻垢分枝杆菌,MSMEG_0372基因,基因敲除,基因回补,基因过表达

基金资助：国家自然科学基金项目(81560264)