重组人Neuritin蛋白生物学活性的定量分析方法

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2022年第5期北京时间：

作者：王宿洁, 宋丹丹, 李煜, 孟平平, 朱金辉, 朱礼彦, 黄瑾

单位：1 石河子大学医学院,新疆 石河子 832000;<br/>2 杭州师范大学公共卫生学院,浙江 杭州 310036

摘要：目的建立一种快速高效地定量评价重组人Neuritin(rhNeuritin)蛋白生物学活性的新方法。方法首先建立小鼠海马神经元细胞(HT22细胞)维持培养条件。在此条件下,明确rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间。根据11组不同浓度梯度的rhNeuritin蛋白对HT22细胞存活的影响,建立标准品rhNeuritin蛋白与HT22细胞存活的量效关系曲线;并确定rhNeuritin蛋白的检测范围。在rhNeuritin蛋白的检测限内,根据标准品rhNeuritin蛋白与HT22细胞存活之间的量效关系的拟合曲线,制订标准品蛋白的活性单位,建立了针对rhNeuritin蛋白生物学活性的评价体系。利用两批测试品rhNeuritin蛋白,对该方法的重复性和准确性进行了验证。结果HT22细胞的维持培养液的浓度为0.4%FBS,rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间为72h,rhNeuritin蛋白浓度在62.5~1000ng·mL-1的检测限内,HT22细胞的存活与rhNeuritin蛋白的浓度呈正相关。在rhNeuritin蛋白的检测线内,拟定标准品的EC50为一个活性单位。两组测试品rhNeuritin蛋白的量效关系曲线与标准品呈现相同趋势,3者R2均大于0.9,说明该方法的重复性很好。通过拟订的标准品的活性单位,计算得到500ng·mL-1时测试品1和测试品2的活性单位分别为1.059、1.069,而实验实际测得测试品1和测试品2的活性单位分别为1.074和1.088,与测定的活性单位相比,两组测试品计算得到的活性单位的误差小于2%,说明该实验方法具有较好的准确性。结论成功建立了重组人Neuritin蛋白的定量检测方法,并制定了明确的活性单位。

关键词：重组人Neuritin蛋白,小鼠海马神经元HT22细胞,细胞存活率,活性单位

基金资助：国家科技重大专项(民口)重大新药创制项目(2019ZX09301-161);浙江省重点研发项目(2019C03060)