CSDC2蛋白免疫优势肽段分析及其多克隆抗体的制备

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2023年第2期北京时间：

作者：朱荷青, 玛哈巴·肉孜, 李莹莹, 张洁, 许赫, 李甜甜, 韩吉龙, 彭夏雨, 杨敏

单位：1 石河子大学动物科技学院,石河子 832000; <br/>2 新疆维吾尔自治区畜牧总站,乌鲁木齐 830000

摘要：目的为制备含有C2的冷休克结构域(coldshockdomaincontainingC2,CSDC2)的特异性抗体,本试验预测了CSDC2蛋白的免疫优势肽段并制备多克隆抗体,可为进一步探究其功能奠定基础。方法本研究以绒山羊CSDC2蛋白全长氨基酸序列为基础,应用在线分析工具Expasy分析亲疏水性;SOPMA和Predictprotein共同分析二级结构;DNAstar分析抗原指数、表面可及性、柔韧性;TMHHM2.0预测跨膜结构;SWISS-MODEL预测三级结构;SignalP5.0预测信号肽;NetPhos3.1预测磷酸化位点;SVMTriP在线分析软件预测抗原表位,综上分析获得CSDC2免疫优势肽段,制备多克隆抗体;ELISA检测多克隆抗体效价,Westernblot验证抗体特异性。结果CSDC2为不稳定亲水蛋白,无跨膜结构和信号肽区域,具有22个磷酸化位点,二级结构主要由无规则卷曲、α-螺旋和延伸链构成。最终选取绒山羊CSDC2蛋白N-端15-33氨基酸序列(HSPKSPVWPTFPFHREGSR)为特异免疫肽段,诱导兔产生CSDC2蛋白特异性IgG抗体,Westernblot结果表明该抗体可以与绒山羊CSDC2蛋白进行特异性结合。结论本研究得出绒山羊CSDC2的免疫优势肽段为15~33aa(HSPKSPVWPTFPFHREGSR)并免疫试验兔制备了多克隆抗体,进一步实验证明该抗体具有较好生物学效价,为后续深入研究CSDC2在绒山羊绒毛周期性生长调控的作用奠定了理论基础。

关键词：绒山羊,CSDC2,生物信息学分析,毛囊周期性生长,多克隆抗体

基金资助：国家自然基金项目(31802045),石河子大学青年创新拔尖人才项目(CXBJ201903)