泛素E3连接酶CHIP介导RCC2的泛素化及降解

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2023年第3期北京时间：

作者：李贝, 范宇宸, 赵博

单位：上海交通大学药学院,上海 200240

摘要：目的本课题组前期构建了一种正交泛素传递方法,并发现染色体浓缩调节蛋白2(RCC2)是泛素连接酶CHIP的潜在底物。本实验旨在验证CHIP是否能介导RCC2的泛素化及降解,以期通过CHIP来泛素化调控RCC2的表达和功能。方法首先构建CHIP及其突变体质粒,验证CHIP与RCC2是否有相互作用;然后构建pLVX-RCC2-FLAG重组质粒并转染进CHIP敲减细胞株(shCHIP)、HEK293细胞株、CHIP过表达细胞株(OECHIP),通过免疫共沉淀下拉富集RCC2-FLAG并检测其泛素化水平;接下来在HEK293细胞中转染不同量的CHIP,以及设置CHXchase蛋白稳定性实验,检测RCC2的蛋白水平变化;最后利用泛素突变体K48R-Ub及K11R-Ub进行CHIP介导RCC2上形成泛素链的实验检测。结果在HEK293细胞中,CHIP能够介导RCC2的泛素化,并在RCC2上形成K48和K11多聚泛素链,促进其通过蛋白酶体发生降解。结论泛素连接酶CHIP能够介导RCC2的泛素化及降解,为实现通过CHIP来泛素化调控RCC2提供了理论基础。

关键词：泛素化,泛素连接酶CHIP,染色体浓缩调节蛋白2,降解

基金资助：国家自然科学基金项目(31971187),上海市科委基础研究领域项目(20JC1411200)