miR-181a靶向Bcl-2调控氧糖剥夺/再灌注模型诱导的 SH-SY5Y神经细胞凋亡

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2024年第1期北京时间：

作者：袁珊, 杨玉莹, 许梅梅, 胡广泽, 高蕊

单位：石河子大学医学院生物化学教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室, 新疆 石河子 832000

摘要：目的皮层是响应脑缺血缺氧最为敏感的组织之一,基于前期深度测序技术,我们筛选获得响应脑缺血缺氧应激的皮层区目标基因miR-181a及Bcl-2。本研究旨在SH-SY5Y细胞株氧糖剥夺/复糖复氧模型验证二者靶向调控关系及功能,明确miR-181a—Bcl-2调控网络在OGD/R诱导的神经细胞凋亡中的作用。方法采用线栓法构建大鼠缺血缺氧再灌注损伤模型,脑切片TTC染色及行为学评分法评估模型。应用qRT-PCR及WesternBlot验证目标基因的表达。生物信息学分析miR-181a与Bcl-2的靶向结合位点并比对结合位点的保守性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181a与Bcl-2靶向结合的特异性。采用OGD/R细胞模型体外模拟脑缺血再灌注损伤,检测凋亡相关蛋白表达及Hoechst荧光染色评估细胞凋亡。结果大鼠大脑中动脉阻塞后miR-181a、Bcl-2表达变化趋势相反。RNAhybird软件预测miR-181a可结合Bcl-2的3'-UTR区,且结合区域高度保守。双荧光素酶报告基因实验发现,相对于Bcl-23'UTR-WT与mimic-NC共转染组,Bcl-23'UTR-WT与miR-181amimic共转染后的荧光活性更低(P＜0.001),而Bcl-2-Mut与miR-181amimic共转染组,荧光活性无显著差异(P＞0.05)。分别用miR-181a的模拟物及抑制物转染OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞,miR-181a可以抑制Bcl-2mRNA及其蛋白的表达水平(P＜0.001)。过表达miR-181a显著增加了SH-SY5Y细胞的凋亡(P＜0.001),而抑制miR-181a表达可使SH-SY5Y细胞凋亡显著降低(P＜0.001)。结论miR-181a可靶向结合Bcl-2,下调miR-181a可通过促进Bcl-2的表达进而抑制SH-SY5Y神经细胞OGD/R损伤诱导的细胞凋亡。

关键词：miR-181a,Bcl-2,SH-SY5Y,OGD/R,凋亡

基金资助：国家自然科学基金项目(32260142);新疆生产建设兵团区域创新引导计划项目(2021BB002)