Neuritin野生型蛋白的制备及活性、稳定性的检测及分析

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2024年第2期北京时间：

作者：朱礼彦, 孟平平, 李煜, 宋丹丹, 孙嘉伟, 汪海燕, 朱金辉, 魏韬艺, 杨磊

单位：1 石河子大学医学院,新疆 石河子 832000; <br/>2 杭州师范大学公共卫生学院,浙江 杭州 310036

摘要：目的制备符合药典结构要求的无标签Neuritin野生型(wildtype,WT)蛋白,并完成其存在形式、活性及稳定性鉴定及分析。方法利用基因重组技术构建符合药典结构要求的NeuritinWT酵母重组子,利用SDS-PAGE还原电泳及Westernblot对其进行高表达筛选及鉴定;摸索建立无标签NeuritinWT蛋白纯化方法,对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE还原电泳分子量鉴定、Westernblot免疫原性鉴定、SEC-HPLC精细鉴定及宿主DNA、宿主蛋白残留量检测;利用SDS-PAGE非还原电泳完成存在形式的鉴定;通过参照药典建立的重组Neuritin蛋白活性鉴定方法,检测并分析NeuritinWT纯化蛋白的活性,并观察37℃下不同时间NeuritinWT纯化蛋白的稳定性。结果制备了纯度高达98%以上的NeuritinWT纯化蛋白,蛋白相对分子质量为9.7kDa,宿主DNA残留量为0.0094ng/剂,宿主蛋白残留量占比0.0008%;经检测,该纯化蛋白存在单体、二聚体2种形式。活性鉴定结果表明该蛋白具有维持神经元存活的生物学活性;且37℃下3d内降解率小于10%、7d内未到达半衰期(蛋白降解率小于35%)。结论成功制备了纯度高达98%、杂质含量及结构符合药典要求的无标签NeuritinWT蛋白,分析了NeuritinWT蛋白的存在形式,并明确了该蛋白具有较好的生物学活性及稳定性,为Neuritin进一步功能、药学研究及生物制品的研制提供了物质基础。

关键词：Neuritin野生型蛋白,纯度,存在形式,神经元存活,稳定性

基金资助：国家重大新药创制科技重大专项项目(2019ZX09301161);石河子大学自主资助支持校级科研项目(ZZZC202136)