基于CRISPR/Cas9技术的SS18-SSX1阳性细胞模型的构建与验证

来源：石河子大学学报·自然科学版杂志2025年第1期北京时间：

作者：田娇, 张乾儒, 王宁, 史奇, 李亚, 张琨岚, 李锋

单位：1 石河子大学医学院,新疆 石河子 832000;<br/>2 首都医科大学附属北京朝阳医院医学研究中心,北京 100200

摘要：目的利用CRISPR/Cas9技术构建并验证SS18-SSX1+-HEK293T细胞模型。方法靶向SS18和SSX1分别设计sgRNA,构建Lentivirus-CRISPRv2-SS18-gRNA-SSX1-gRNA-EGFP一体化慢病毒载体,通过慢病毒转染和荧光流式分选技术筛选转入载体的HEK293T多克隆细胞,在多克隆细胞的基础上挑选SS18-SSX1阳性的单克隆细胞株,通过RT-PCR、Sanger测序和WesternBlot验证SS18-SSX1+-HEK293T单克隆细胞系构建成功。结果成功构建了Lentivirus-CRISPRv2-SS18-gRNA-SSX1-gRNA-EGFP慢病毒载体;通过RT-PCR、Sanger测序和WB实验在178个HEK293T单克隆细胞中成功筛选并验证出1株SS18-SSX1阳性的单克隆细胞系。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建SS18-SSX1融合基因阳性的HEK293T细胞系。

关键词：CRISPR/Cas9,滑膜肉瘤,SS18-SSX1,HEK293T细胞

基金资助：国家自然科学基金项目(82173057,82002846)