富士苹果中膜结合态多酚氧化酶分离纯化方法

来源：农业机械学报杂志2015年第2期北京时间：

作者：刘芳,甘芝霖,赵金红,温馨,倪元颖

单位：中国农业大学,中国农业大学,中国农业大学,中国农业大学,中国农业大学,

摘要：以烟台红富士为原料，研究膜结合态多酚氧化酶(mPPO)的分离纯化条件，采用非离子型去污剂结合热诱导方法粗提，硫酸铵分级沉淀，DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析方法对mPPO进行纯化，并对其进行串联质谱(LC—MS/MS)分析鉴定。结果表明mPPO提取纯化最佳条件为：超声提取10min，50%~80%饱和度硫酸铵沉淀，0.1mol/L NaCl 梯度洗脱。纯化后的mPPO纯度提高了64.30倍，比活力高达387032.97U/mg。纯化后的mPPO经SDS—PAGE和Native—PAGE分析均为单一蛋白带，且为亚基分子量67kDa的二聚体。经串联质谱分析及蛋白数据库鉴定此纯化蛋白为多酚氧化酶。

关键词：富士苹果 多酚氧化酶 分离纯化 膜结合态 离子交换柱层析 串联质谱

基金资助：“十二五”国家科技支撑计划资助项目(2012BAD31B00)