兼性离子修饰亲水磁珠固定化谷胱甘肽-S-转硫酶P1及其表征

来源：精细化工杂志2020年第4期北京时间：

作者：杨林玉

摘要：摘要: 谷胱甘肽-S-转硫酶 P1(Human glutathione-S-transferase π1，hGSTP1) 为肿瘤耐药增敏药靶。为探索磁珠固定化hGSTP1的合适方案用于磁分离指数富集从混合物中筛选高亲和力配体，重组表达6×His-hGSTP1，分别用Ni2+-NTA琼脂糖和GSH-Sepharose 4B层析柱纯化，采用亲水兼性离子修饰的羧基磁珠和Ni2+-NTA磁珠固定化6×His-hGSTP1，表征其固定化容量、保留活性、稳定性以及对抑制剂响应性。羧基磁珠不能有效固定GSH-Sepharose 4B层析柱纯化hGSTP1，可有效固定Ni2+-NTA层析柱纯化hGSTP1，但最大保留酶活仅约30%。Ni2+-NTA磁珠可有效固定两种方法纯化蛋白，其饱和固载容量约为羧基磁珠的1.7倍且最大保留酶活均可达80%。Ni2+-NTA磁珠固定化hGSTP1在pH 6.5 PBS 中 0 ℃振摇8 h活性未见明显改变，相同条件游离酶活性下降约20%；在筛选后甲醇80 ℃处理20 min不脱落。Ni2+-NTA磁珠固定化hGSTP1和游离酶对抑制剂依他尼酸(Ethacrynic acid，EA)的IC50无显著性差异(P>0.05)。因此，Ni2+-NTA 磁珠固定化hGSTP1可适用于指数富集筛选混合物库中抑制剂 。

关键词：谷胱甘肽-S-转硫酶;固定化;磁珠;混合物筛选

基金资助：国家自然科学基金项目（面上项目，重点项目，重大项目）