虎杖MYB转录因子PcMYB2基因的克隆与原核表达

来源：江苏农业科学杂志2018年第第23期北京时间：

作者：李晓筱; 徐俊雄; 刘婵; 王岩岩; 伍翔; 覃建兵; 柳忠玉

单位：长江大学生命科学学院，湖北荆州 434025

摘要：为了探究MYB(髓细胞组织增生病毒癌基因同源物)转录因子在虎杖苯丙烷代谢途径中的作用，以虎杖叶片为材料，通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得1个MYB转录因子，命名为PcMYB2，GenBank登录号为MG020557。序列分析表明，PcMYB2基因的cDNA序列全长为 938 bp，开放阅读框(ORF)为738 bp，编码245个氨基酸，推测蛋白质分子质量为27.917 ku。PcMYB2编码的氨基酸序列具有R2R3-MYB类转录因子的共同特征，其N端具有R2、R3这2个MYB结构域，并且R3结构域中包含1个能与bHLH转录因子相互作用的［D/E］Lx2［R/K］x3Lx6Lx3R基序。进化树分析表明，PcMYB2蛋白与苜蓿中参与原花青素调控的MtPAR聚为1组。将该基因的ORF片段连接到原核表达载体pET20b中，构建融合表达载体pET20b-PcMYB2，转化到大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)检测显示表达蛋白与预期大小一致，表明成功克隆PcMYB2基因的cDNA全长序列，构建的原核表达载体pET20b-PcMYB2可用于该基因的功能研究。

关键词：虎杖;MYB转录因子;PcMYB2'PcMYB2;原核表达;苯丙烷代谢;原花青素

基金资助：国家自然科学基金(编号：81803670)；国家级大学生创新项目(编号：201810489013)；长江大学校级大学生创新训练计划(编号：2017073)。