一步法逆转录重组酶聚合酶常温扩增(RT-RPA)技术
检测菜豆荚斑驳病毒

来源：江苏农业科学杂志2018年第第21期北京时间：

作者：张永江; 魏霜; 袁俊杰; 乾义柯; 李桂芬; 魏梅生

单位：1.中国检验检疫科学研究院，北京 100176； 2.广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广东广州 510632；3.湛江出入境检验检疫局，广东湛江 524000； 4.伊犁出入境检验检疫局，新疆伊宁 835221

摘要：菜豆荚斑驳病毒(bean pod mottle virus，简称BPMV)是我国进境植物检疫性有害生物，建立快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification，简称RT-RPA)技术用于对BPMV的检测。根据BPMV基因组的保守序列，设计重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification，简称RPA)技术特异性引物，对BPMV、南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus，简称SBMV)、大豆花叶病毒(soybean mosaic virus，简称SMV)、南芥菜花叶病毒(arabis mosaic virus，简称ArMV)及烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus，简称TRSV)共5种病毒进行RT-RPA特异性验证；并设计5个模板浓度梯度，以验证RT-RPA方法的灵敏性。结果表明，建立的RT-RPA检测方法能够从BPMV样品中检测到198 bp的特异性条带，且仅需在40 ℃下恒温反应40 min，不需要特殊的仪器设备；特异性验证试验表明，除BPMV能检测到特异性条带外，其他4种病毒SBMV、SMV、ArMV、TRSV均未检测到特异性条带，证明该方法特异性好；RT-RPA检测BPMV的灵敏度达到10-4稀释度，说明所建立的RT-RPA方法灵敏性高。综上所述，建立的RT-RPA方法检测BPMV特异性强、灵敏度高，无需特殊的仪器设备，适合实验室或者现场快速检测。

关键词：菜豆荚斑驳病毒;RT-RPA检测;植物检疫

基金资助：国家重点研发计划(编号：2016YFF0203200)；广东出入境检验检疫局科技计划(编号：2017GDK76)。