利用重叠PCR法克隆里氏木霉β-葡萄糖苷酶基因cel1a

来源：江苏农业科学杂志2018年第第21期北京时间：

作者：汪伟; 孙春娃; 杨爱文; 金皓; 姚萍; 袁维维; 徐建明; 周玉珍

单位：淮阴师范学院/江苏省环洪泽湖生态农业技术重点实验室，江苏淮安 223300

摘要：在利用里氏木霉降解纤维素为葡萄糖继而发酵生产液体燃料和大宗化学品的工业生产过程中，降解纤维素为葡萄糖是关键的一步。β-葡萄糖苷酶在调控纤维素酶的活性及其表达时起到至关重要的双重作用。为了研究β-葡萄糖苷酶Cel1a在里氏木霉Rut C-30中对纤维素酶诱导表达及其酶活性的影响，以里氏木霉的基因组DNA为模板，设计扩增看家基因(β-actin)的启动子(Pact)和cel1a的引物，分别进行Pact、cel1a的PCR扩增，然后利用重叠PCR将Pact、cel1a连成1个片段Pact-cel1a，再通过酶切成功地将Pact-cel1a片段连接到pCAMBIA1300二元质粒上，从而为后续研究β-葡萄糖苷酶在调控纤维素酶的酶活性及其表达过程中的作用奠定了基础。

关键词：重叠PCR;β-葡萄糖苷酶cel1a'β-葡萄糖苷酶cel1a;里氏木霉

基金资助：江苏省自然科学基金面上项目(编号：BK20131213)；淮安市科技计划(编号：HG201307)；江苏省生物质与酶技术重点实验室项目(编号：JSBEET1303)。