蓝杆藻ATCC 51142中α-酮戊二酸脱羧酶
的克隆与表达

来源：江苏农业科学杂志2018年第第19期北京时间：

作者：谢琮琮; 许文武; 李至敏; 王小琴; 雷国风; 张伟; 黄婷; 李志敏

单位：1.江西农业大学生物科学与工程学院，江西南昌 330045； 2.江西农业大学理学院，江西南昌 330045

摘要：α-酮戊二酸脱羧酶催化α-酮戊二酸的非氧化脱羧生成琥珀酸半醛，其在琥珀酸半醛脱氢酶的作用下转化为琥珀酸，蓝藻的三羧酸循环由于这2个酶的存在而变得完整。Blast序列分析发现，蓝杆藻ATCC 51142中cce4227基因编码α-酮戊二酸脱羧酶。为了证实cce4227基因编码蛋白的催化功能，从蓝杆藻ATCC 51142基因组中克隆cce4227基因，然后构建pET28a-cce4227表达质粒。将该质粒与pTf16分子伴侣质粒共转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞后进行重组蛋白的诱导表达。利用镍亲和层析方法对cce4227蛋白进行分离纯化，得到纯度>95%的cce4227蛋白，菌体蛋白收率约为12 mg/g。酶动力学测试表明，cce4227蛋白是1个焦磷酸硫胺素(TPP)依赖型的α-酮戊二酸脱羧酶。

关键词：蓝杆藻ATCC 51142;α-酮戊二酸脱羧酶'α-酮戊二酸脱羧酶;基因克隆;重组表达;蛋白质纯化

基金资助：国家自然科学基金(编号：31560250、31400054)；江西省自然科学基金重大项目(编号：20161ACB21012)；江西省教育厅科技研究重点项目(编号：GJJ160353)；江西农业大学国家级大学生创新创业训练项目(编号：201710410005)。