鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的截短表达
及其兔抗血清制备

来源：江苏农业科学杂志2018年第第17期北京时间：

作者：孙芬芬; 高玉龙; 潘伟; 王笑梅

单位：1.徐州医科大学形态学实验教学中心，江苏徐州 221004； 2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨 150001； 3.徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室/江苏省免疫与代谢重点实验室，江苏徐州 221004

摘要：通过制备原核表达鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白(VP1)，以进行抗VP1蛋白兔源血清制备。首先以CIAV M9905株基因组DNA为模板，通过PCR扩增N末端截短129个氨基酸的VP1基因片段(VP1Nd129)，经EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的pET28a(+)载体连接，获得阳性重组子pET-28a-VP1Nd129，将其转化入E.coli BL21(DE3)菌，经IPTG诱导，表达出VP1Nd129蛋白；后者通过Ni-NTA树脂纯化后，免疫新西兰白兔，制备兔抗血清，用间接免疫荧光试验和Western blot试验检测该血清的特异性，用酶联免疫吸附试验(ELISA)滴定其效价。结果显示，CAV VP1Nd129基因在大肠杆菌中正确表达，并主要以包涵体形式存在；纯化后免疫兔获得的抗血清可与真核细胞表达的全长VP1蛋白特异性反应。表明本试验成功对VP1蛋白进行截短表达，制备的兔抗血清反应性好，为深入开展CIAV的生物学功能奠定基础。

关键词：鸡传染性贫血病毒;VP1蛋白;原核表达;纯化;兔抗血清

基金资助：国家肉鸡产业技术体系建设专项(编号：CARS-42-G07)；徐州医科大学优秀人才启动基金(编号：D2015004)。