加工番茄PVYN：O HC-Pro、STV RdRp酵母双杂交
诱饵载体的构建及自激活验证
来源：江苏农业科学杂志2018年第第17期北京时间：
作者：路遥; 周东; 郑银英
单位：石河子大学生命科学学院/石河子大学农业生物技术重点实验室，新疆石河子 832003
摘要：马铃薯Y病毒（potato virus Y，简称PVY）和南方番茄病毒（southern tomato virus，简称STV）是加工番茄上非常普遍的病毒，以从加工番茄cDNA文库中筛选与病毒功能蛋白互作的基因为目标，构建PVY HC-Pro、STV RdRp Cyto Trap酵母双杂交诱饵载体，为抗病基因的筛选工作奠定基础。通过PCR技术，扩增PVY HC-Pro、STV RdRp片段分别克隆到诱饵载体pSos，用酶切、测序结果正确的2个诱饵载体重组质粒转化酵母感受态cdc25H，进行自激活检测及毒性验证。将不同组合的酵母转化液涂布于SD/Glu(-UL)培养基（SD/Glu指含有葡萄糖的SD培养基，-UL指缺失尿嘧啶、亮氨酸2种氨基酸）平板上，于25 ℃培养4 d后，挑取3个单菌落分别划线于2个SD/Glu(-UL)和2个SD/Gal(-UL)培养基上，并分别置于25、37 ℃继续培养5 d。结果表明，在25 ℃培养条件下，SD/Glu(-UL)和SD/Gal(-UL)培养基上酵母菌生长正常；在37 ℃培养条件下，SD/Glu(-UL)培养基上无酵母菌的生长，SD/Gal(-UL) 培养基上阳性组合酵母生长正常，阴性组合酵母均不生长。构建的pSos-HC-Pro、pSos-RdRp诱饵载体没有转录自激活活性和毒害作用，可用于Cyto Trap酵母双杂交系统。
关键词：加工番茄;PVY;STV;酵母双杂交;自激活;诱饵载体
基金资助：国家自然科学基金(编号：31460466)。
