野葛钙离子依赖性核酸酶PlCaN基因
克隆和生物信息学分析

来源：江苏农业科学杂志2018年第第14期北京时间：

作者：郭坤元; 林先明; 何美军; 郭汉玖

单位：湖北省农业科学院中药材研究所，湖北恩施 445000

摘要：拟克隆野葛钙离子依赖性核酸酶PlCaN基因全长cDNA序列，并对其进行生物信息学分析，同时构建其原核表达载体。提取野葛材料总RNA作为模板，利用逆转录PCR(RT-PCR)、 cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends，简称RACE)等方法获取野葛PlCaN的cDNA全长序列，利用相关软件和在线网站进行生物信息学分析，构建原核表达载体pBRT7-PlCaN并鉴定。结果表明，PlCaN的cDNA全长1 008 bp，编码335个氨基酸，预测蛋白质相对分子质量为37.3 ku，理论等电点(pI)为9.4，为亲水性蛋白，无信号肽，表明原核表达载体pBRT7-PlCaN构建成功，为探究其在不同组织中的表达情况，建立原核表达体系，并为后期PlCaN的功能研究提供理论基础。

关键词：野葛;钙离子依赖性核酸酶;基因克隆;原核表达;生物信息学分析

基金资助：湖北省技术创新专项(鄂西民族专项)(编号：2017AKB075)；湖北省农业科学院青年基金(编号：2016NKYJJ32)。