樱桃病毒PNRSV、CGRMV、PDV多重RT-PCR
检测方法的建立与应用

来源：江苏农业科学杂志2018年第第11期北京时间：

作者：周登攀; 郝小军; 向本春

单位：石河子大学农学院/新疆绿洲农业病虫害治理与植保资源利用自治区普通高校重点实验室，新疆石河子 832003

摘要：采用多重RT-PCR方法，建立可同时检测李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus，简称PNRSV)、李矮缩病毒(Prune dwarf virus，简称PDV)、樱桃绿环斑驳病毒(Cherry green ring mottle virus，简称CGRMV)的方法。根据GenBank中PNRSV、PDV、CGRMV的保守基因序列设计特异性引物，并对多重RT-PCR的退火温度、循环数、灵敏度、特异性、dNTPs浓度等因素进行优化，建立能同时检测3种樱桃病毒的多重RT-PCR方法。该方法能同时扩增出PNRSV(675 bp)、CGRMV(363 bp)、PDV(304 bp)特异片段，扩增产物大小与预期相符。测序结果表明，3种病毒的序列与相应参考序列相似性达90%以上。多重RT-PCR反应条件优化结果显示，在退火温度为58 ℃、35个循环条件下，效果均较为理想；dNTP的浓度对试验结果影响不大，最适的浓度为0.6 mmol/L；灵敏度分析结果显示，最低检测浓度为59.7 ng/μL。应用该方法对新疆石河子地区的樱桃样本进行检测，结果显示，该方法可以准确、快速、灵敏地同时检测单一或复合侵染的3种樱桃病毒。

关键词：樱桃绿环斑驳病毒;李属坏死环斑病毒;李矮缩病毒;多重RT-PCR;病原检测;大样品快速检测

基金资助：兵团农作物病害安全防控创新团队项目(编号：0205-KC0017)。