利用实时荧光定量PCR特异检测多环芳烃污染
土壤中的外源降解菌

来源：江苏农业科学杂志2018年第第11期北京时间：

作者：张闻; 郑立稳; 王加宁; 黄玉杰; 张思玉; 高永超; 陈贯虹; 郭书海; 季蕾; 王磊磊

单位：1.齐鲁工业大学(山东省科学院)/山东省科学院生态研究所/山东省应用微生物重点实验室，山东济南 250103；2.中国科学院沈阳应用生态研究所，辽宁沈阳 110164

摘要：生物强化法修复有机污染土壤过程中，外源降解菌的丰度直接关系着修复效果，有必要开发出特定外源降解菌在土壤中的数量检测方法。针对多环芳烃降解菌PPZ-1，基于基因组测序结果，筛选可能的特异基因序列，设计对应引物。比对各组引物对菌株及污染土壤样品DNA的PCR扩增产物，确定适于实时荧光定量PCR检测的特异性基因序列和引物。以含有特异性基因序列的重组质粒为标准品，确定实时荧光定量PCR反应试验条件，建立标准曲线。将该方法应用于投加了菌株PPZ-1的多环芳烃污染土壤，验证其可行性。结果表明，所筛选的特异性引物在菌株中可以扩增出条带，在土壤样品相同位置无明显条带，具有较好的特异性。实时荧光定量PCR反应标准曲线相关系数为 0.999 9，斜率为-3.365，扩增效率为98.233%，熔点曲线无杂峰。对投加了外源降解菌PPZ-1的多环芳烃污染土壤进行绝对定量检测，检测数值与理论值数量级相同，该检测方法能较准确地反映土壤中PPZ-1的数量。

关键词：实时荧光定量PCR;多环芳烃;土壤;外源降解菌;假单胞菌

基金资助：国家自然科学基金(编号：41601331)；国家国际科技合作专项(编号：2014DFE90100)；山东省自然科学基金(编号：BS2015HZ011)；泰山学者工程专项；中国科学院沈阳分院-山东省科学院青年科学家合作伙伴项目。