家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定

来源：江苏农业科学杂志2019年第第23期北京时间：

作者：陈萌萌; 范志宇; 胡波; 宋艳华; 魏后军; 仇汝龙; 朱伟峰; 徐为中; 王芳

单位：江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京 210014

摘要：通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β，IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制，首先以家兔肝细胞总cDNA为模板，利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列，经测序确定全长为550 bp；预测软件分析，与人源IFN-β基因启动子的转录上调区域(positive regulation domain，PRD)高度同源；随后将启动子全长和一系列转录元件克隆至pGL6-Basic荧光素酶表达载体中，成功构建重组体报告基因质粒后，瞬转RK-13细胞，利用试剂盒检测荧光素酶的相对活性。结果显示，克隆的IFN-β基因启动子区和AP-1、IRF3、NF-κB和IRF7等转录元件具有显著的活性，为研究兔出血症病毒对宿主 IFN-β 基因的转录调控机制提供了有效的工具。

关键词：家兔;兔出血症病毒;IFN-β基因'IFN-β基因;启动子;荧光素酶;转录调控

基金资助：国家自然科学基金(编号：31702274)；现代农业产业技术体系建设专项资金(编号：CARS-43-C-1)。