绿绒蒿SSR-PCR反应体系的建立与优化

来源：江苏农业科学杂志2019年第第08期北京时间：

作者：熊健; 屈燕; 冷秋思; 赵琬玥

单位：西南林业大学园林植物与观赏园艺省高校重点实验室/西南林业大学园林学院，云南昆明 650224

摘要：为建立适合绿绒蒿属(Meconopsis Vig.)的SSR反应体系，以多刺绿绒蒿(M. horridula)为试材，应用L25(56)进行正交试验，对影响SSR-PCR的主要因素进行优化。结果发现，Mg2+对PCR反应效果影响最大，而dNTPs的影响最小。5个因素水平的变化对绿绒蒿属SSR-PCR反应体系的影响从大到小依次为Mg2+＞Taq酶含量＞引物浓度＞DNA模板量＞dNTPs浓度。适宜绿绒蒿属的SSR反应体系：总体积25 μL，Mg2+浓度2 mmol/L，dNTPs浓度 0.2 mmol/L，引物浓度 0.5 μmol/L，DNA模板量60 ng，Taq聚合酶量 1.6 U，其余用ddH2O补充。扩增程序为94 ℃ 15 min；94 ℃ 20 s，最适退火温度20 s，72 ℃ 1 min，共35个循环；72 ℃ 5 min；4 ℃ 保存。利用优化后的反应体系对同属另外8种绿绒蒿(M. wallichi、M. racemosa、M. lingholm、M. prattii、M. rudis、M. napaulensis Pinky、M. paniculata、M. superba)进行PCR扩增，均获得优良的扩增产物。因此，该试验建立的反应体系适用于绿绒蒿属植物的 SSR-PCR 反应。

关键词：绿绒蒿;SSR;PCR体系优化

基金资助：国家自然科学基金 (编号：31460218)；云南省高校重点建设学科(风景园林学)建设项目；云南省农业基础研究联合专项［编号：2017FG001(-68)］；国家级质量工程园林专业综合改革试点项目(编号：50126002)。